开发时间分辨ssDNP 技术，捕捉酶催化 过程中间态的相关数据

在非血红素铁/α-酮戊二酸（αKG）依赖性酶（这是铁在生物体中存在的主要形式之一）中，αKG可采取两种不同的结合模式，根据其C-1羧基的取向分为“线性（in-line）”和“非线（off-line）”。一种涉及Fe(IV) = O中间体的经典机制已在“in-line”酶中提出。然而，“off-line”酶尚未提出合理的催化机制，因为αKG在这种结合模式下阻碍Fe离子上的活性氧接近底物。本研究中，我们基于一种“off-line” 的αKG依赖性反式L-脯氨酸羟化酶UbPH的反应中间体晶体结构及酶活分析，发现了Fe离子的固定配位方向，并在提出了一种涉及Fe离子释放和更新的非血红素αKG酶潜在催化机制。